小鼠基質金屬蛋白酶9(MMP-9)elisa試劑盒基本信息

MMPs幾乎能降解ECM中的各種蛋白成分,破壞腫瘤細胞侵襲的組織學屏障，在腫瘤侵襲轉移中起關鍵性作用，從而在腫瘤浸潤轉移中的作用日益受到重視，被認為是該過程中主要的蛋白水解酶。目前MMPs家族已分離鑒別出26個成員，編號分別為MMP1～26。根據作用底物以及片斷同源性，將MMPs分為6類，為膠原酶、明膠酶、基質降解素、基質溶解素、furin活化的MMP和其他分泌型MMP。Ⅳ型膠原酶為其中重要的一類，它主要有兩種形式，一種被糖化，分子量為92kD，命名為MMP-9;另一種非糖化，分子量為72kD，被稱為MMP-2。當前對MMP-2，MMP-9的研究較深入。MMP-2基因位于人類染色體16q21，由13個外顯子和12個內含子所組成，結構基因總長度為27kb，與其他金屬蛋白酶不同，MMP-2基因5’旁側序列促進子區域含有2個GC盒而不是TATA盒。活化的MMP-2定位于細胞穿透基質的突出部位，估計其在酶解細胞間基質成分及基底膜的主要成分Ⅳ型膠原中有“鉆頭”的作用。

小鼠基質金屬蛋白酶9(MMP-9)elisa試劑盒操作方法簡介

實驗開始前，請提前配置好所有試劑，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。

1. 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。

為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl（取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制），37℃,60分鐘。

3. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同生物素標記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。

5. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8. 用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。

購買我司elisa試劑盒可以提供免費代測服務，客戶準備好樣本，上海和南京地區的客戶可以提供免費上門取樣服務。其他地區的客戶，樣本用泡沫箱子包好，放干冰或者冰袋寄送給我們。代測時間為5到7個工作日提供原始數據，分析數據， 實驗操作步驟以及實驗所用儀器。