RT-PCR檢測(cè)服務(wù)，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)服務(wù)

上海信帆生物專業(yè)代做RT-PCR實(shí)驗(yàn)，熒光定量PCR技術(shù)是普通PCR技術(shù)的改良和發(fā)展，它提高了普通PCR技術(shù)的特異性和準(zhǔn)確性，能做到實(shí)時(shí)監(jiān)控和準(zhǔn)確定量，廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)研究、研究檢驗(yàn)、海關(guān)商貿(mào)檢疫等各個(gè)領(lǐng)域。

1.技術(shù)優(yōu)勢(shì)：

*靈敏度高，可以檢測(cè)低拷貝的目的基因

*高精度，PCR擴(kuò)增階段包括3個(gè)階段：指數(shù)增長期，線性增長期和平臺(tái)期，96個(gè)重復(fù)指數(shù)增長期表現(xiàn)出高精度，而平臺(tái)期則變化差異較大

*定量能力強(qiáng)，簡單的流程就能得到高質(zhì)量的定量數(shù)據(jù)

*動(dòng)力學(xué)范圍寬，可以定量9個(gè)數(shù)量級(jí)的差異，速度快，節(jié)省時(shí)間和勞力，不需要電泳檢測(cè)
*安全，使用熒光染料發(fā)光，不用EB或放射性物質(zhì)，極大降低對(duì)實(shí)驗(yàn)人員健康的威脅
*重復(fù)性好

2.檢測(cè)方法

 (1) SYBR Green Ⅰ

   游離狀態(tài)下的SYBR Green分子發(fā)出微弱的熒光信號(hào)，當(dāng)與dsDNA雙螺旋小溝區(qū)域結(jié)合時(shí)，則發(fā)出綠色熒光，可在520nm波長下檢測(cè)熒光信號(hào)，熒光信號(hào)的強(qiáng)度與dsDNA數(shù)量呈正相關(guān)。

SYBR Green Ⅰ染料法的特點(diǎn)：

   高靈敏度，低背景信號(hào)，操作簡單，不影響酶促反應(yīng)，價(jià)格便宜。

(2)探針法：TaqMan熒光探針，MGB探針

  TaqMan 熒光探針是一種寡核苷酸探針，熒光基團(tuán)連接在探針的5`末端，一般用FAM、VIC、HEX、Cy3、Cy5等熒光基團(tuán)，而淬滅劑則在3`末端，一般為TAMRA、BHQ1、BHQ2等，其中TAMRA發(fā)出黃色熒光，BHQ1和BHQ2不發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。

  TaqMan-MGB探針與普通TaqMan熒光探針相比具有更短的序列和更高的序列特異性，常被用于SNP分型的研究中，有望成為基因診斷和個(gè)體化用藥分析的技術(shù)平臺(tái)。

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探針法的特點(diǎn)：

  與染料法相比具有更低的背景信號(hào)，更高的靈敏度，可以檢測(cè)低于10個(gè)分子的模板，更高的特異性，結(jié)果也更準(zhǔn)確。同時(shí)也具有染料法的操作簡單，不影響酶促反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)。

3.檢測(cè)周期
常規(guī)檢測(cè)任務(wù)2－3周內(nèi)完成，具體時(shí)間根據(jù)要檢測(cè)的基因和樣本數(shù)而定

4.報(bào)告內(nèi)容

提供電泳圖片，引物調(diào)試與樣本擴(kuò)增相關(guān)圖片（擴(kuò)增曲線/溶解曲線/標(biāo)準(zhǔn)曲線），定量PCR導(dǎo)出的原始數(shù)據(jù)，結(jié)果的初步匯總分析以及實(shí)驗(yàn)報(bào)告；

5.送樣要求

1、組織樣本在取樣后，迅速放入Trizol或RNA保存液中；

2、細(xì)胞請(qǐng)用培養(yǎng)基,Trizol或RNA保存液；

3、RNA保存液保存的樣本可冰袋運(yùn)輸；其它保存條件請(qǐng)干冰運(yùn)輸。

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